体外生物测定

为了确保生物制药产品质量稳定、安全有效,以及确认创新药和生物仿制药产品的生物可比性,就要进行体外生物测定。反过来,这些检测必须可靠、标准化且相关,从而可以反映产品的作用模式。


网络研讨会:生物测定的关键试剂

抗体攻击病毒的图片

关键试剂对生物测定的性能有多重要?

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体外生物测定服务

查看下面适合满足许多不同产品基于细胞的生物测定检测需求的技术和测定。如需更深入地了解我们在单克隆抗体疗法激素和细胞因子疗法以及细胞和基因疗法产品方面的经验, 请访问位于 Source℠(我们的技术、科学和教育资源门户)中的技术说明书。


基于细胞的生物测定技术

  • 流式细胞术

    除了传统的基于细胞的生物测定外,流式细胞术还提供一种快速、高度特异性且准确的 定量读数工具,尤其适用于复杂的异质样本。它允许在单个细胞水平上实时(每秒数千个粒子)同时、多参数和快速地分析物理和化学特性。可以检测复杂的异质样本,并且可以关联多个标记。

    应用

    • 单克隆抗体疗法的作用方式测定
    • 抗原、受体或配体密度(例如,结合测定和竞争性结合测定)
    • 细胞因子的多重分析(CBA 技术)
    • 基于细胞的免疫原性
    • 细胞内蛋白表达
    • 转基因产品体内 (例如,绿色荧光蛋白[GFP])
    • 酶活力
    • 磷蛋白分析
    • 细胞凋亡/活力
    • 细胞周期分析
    • 细胞内 pH、钙和谷胱甘肽的变化
    • 各种组合(DNA/表面抗原等)
    • 原代细胞的过程质量控制
  • 时间分辨荧光

    时间分辨荧光方法用于基于细胞的生物测定,它基于微量滴定板中的荧光共振能量转移 (FRET)。 这种方法通常用于第三代抗癌和抗炎药,通常要激活/作用于靶细胞中的特定磷酸化途径。为了证明这些药物的作用模式,检测必须反映相关途径中关键介质的磷酸化作用。

    与用于测定磷酸化的经典方法(例如 ELISA)相比,该方法的优点是本底低,检测灵敏度高,假阳性或假阴性结果少,适用于基于细胞的检测。

    均相时间分辨荧光 (HTRF) 技术是一种有趣的方法,可用作替代的作用模式分析。

 

基于产品的特定细胞生物测定

  • 细胞因子/抗病毒化合物

    对各种细胞因子产品(IFN-α、IFN-β)的药典生物测定已进行了近二十年。这些生物测定基于细胞因子对病毒对易感细胞系的细胞病变效应的抑制活性。所有检测均符合《欧洲药典》的要求,并已根据 ICHQ2(R1) 进行验证。

    化合物 测定
    IFNα 2b 增殖试验
    IFNβ 1a 增殖试验
    IFNβ 1b 增殖试验
  • 生长因子和激素

    人类生长因子(如 EPO、GMCSF 和 G-CSF)的效力是用经典的增殖测定法测量的。这些检测方法已成功应用于原研药以及第一代和第二代生物仿制药产品。检测符合适用的《欧洲药典》要求,并且所有检测均已根据 ICHQ2(R1) 进行验证。

    对于甲状旁腺激素 (PTH),基于细胞的测定是基于环 AMP (cAMP) 释放的测定进行的,通过均相时间分辨荧光 (HTRF) 或 ELISA 进行检测。该方法已根据 ICHQ2(R1) 进行了验证。

    化合物 测定
    G-CSF;pegG-CSF 增殖试验
    GM-CSF;pegGM-CSF 增殖试验
    PTH 和修饰的 PTH HTRF cAMP 测定(选择方法)
    EPO 和修饰的 EPO 增殖试验
  • 单克隆抗体

    通过使用替代报告细胞系作为效应细胞替代物来测量抗体依赖性细胞毒性 (ADCC) 。出于检定或生物可比性的目的,可以运行初级 ADCC 测定,其中使用从外周血单核细胞 (PBMC) 新鲜分离的 NK 效应细胞或基于报告基因的生物测定, 通过 LDH 释放测量活性。根据产品选择目标细胞系。

    抗体依赖性细胞吞噬作用 (ADCP) 使用基于发光的报告基因生物测定法或流式细胞术测量,巨噬细胞从 PBMC 分离的单核细胞分化而来。

    补体依赖性细胞毒性 (CDC) 通过基于发光的方法或使用活/死鉴别染料的流式细胞术测量。合适的靶细胞系被抗体标记并被补体级联攻击。

    凋亡/程序性细胞死亡 (PCD) 通过通路特异性检测(例如 Caspase 3/7)或通过基于流式细胞术的检测或基于报告基因的检测进行监测(例如,早期死亡)来解决。
     

    名称 测定 目标 商标名创新药
    利妥昔单抗
    • 带有流式细胞仪读数的表位结合测定
    • ADCC 报告基因生物测定
    • ADCP 报告基因生物测定
    • 带有发光或流式细胞仪读数的 CDC 检测
    • 细胞凋亡 FACS 测定(膜联蛋白 V)
    • 带有初级效应细胞和 LDH 读数的 ADCC 测定
    • 使用原代巨噬细胞进行 ADCP 检测
    CD20 美罗华、利妥昔单抗
    曲妥珠单抗
    • ADCC 报告基因生物测定
    • 增殖试验
    HER2 赫塞汀
    西妥昔单抗
    • ADCC 报告基因生物测定
    • 基于 CDC 发光
    ERBB2 爱必妥
    阿达木单抗
    • 带有流式细胞仪读数的竞争性结合测定
    • ADCC 报告基因生物测定
    • ADCP 报告基因生物测定
    • 带有发光读数的增殖测定
    • 带有流式细胞仪读数的膜联蛋白 V 细胞凋亡测定
    • NFkB 报告基因生物测定
    • 带有发光读数的半胱天冬酶 3/细胞凋亡测定
    TNF 修美乐
    英夫利昔单抗
    • 带有发光读数的增殖测定
    TNF 英夫利昔单抗
    依那西普
    • 带有发光读数的半胱天冬酶 3/细胞凋亡测定, NFkB 报告基因
    TNF 恩利
    贝伐单抗
    • VEGF 报告基因生物测定
    • 使用原代 HUVEC 细胞进行中和试验
    VEGF 阿瓦斯汀
    兰尼单抗
    • VEGF 报告基因生物测定
    • 使用原代 HUVEC 细胞进行中和试验
    VEGF 雷珠单抗
    帕利珠单抗
    • ADCC 报告基因生物测定
    • ADCP 报告基因检测
    • CDC 测定
    • 微量中和试验
    RSV 帕利珠单抗
    优特克单抗
    • IL12/IL23 报告基因生物测定
    IL12/IL23p40 Stelera
    伊匹单抗
    • CTLA4 报告基因生物测定
    • ADCC 报告基因生物测定
    CTLA4 伊匹单抗
    帕博利珠单抗、纳武利尤单抗
    • PD1/PD1L 报告基因生物测定
    PD1/PD1-L 可瑞达、欧狄沃
    苏金单抗
    • 带有 IL-6 读数的 HTRF 生物测定
    IL-17A 苏金单抗

 

目标特异性报告基因生物测定

对于不遵循经典作用机制 (MOA) 途径的单克隆抗体疗法,可以使用靶向特异性报告基因解决方案;(例如,用于抗 VEGF 抗体疗法)。对于某些细胞因子,例如 IL-2,也可以使用目标特异性报告基因解决方案。 

我们提供全套体外生物测定服务,以帮助推进从早期研究到商业化的项目。这意味着我们可以提供更多检测,从而实现更好的沟通、更短的交付周期和更少的样本量要求。

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关于基于细胞的生物测定的常见问题 (FAQ)

  • 最常见的生物测定类型有哪些?
    • 具有不同读数的基于细胞的结合测定(例如流式细胞术、ELISA)
    • 增殖检测
    • 细胞死亡检测
    • 反映 mAb 疗法经典免疫途径的检测(ADCC、ADCP、CDC)
    • 通过激活相关信号通路反映药物 MoA(作用机制)的替代报告分析
  • 什么是生物活性测定?

    生物活性测定应反映药物的作用机制 (MoA)。它测量药物在相关测定系统内与适当的参考项目相比引起某种剂量依赖性反应的能力,并报告相对生物活性。

  • 基于细胞的效力生物测定检测可确定什么?

    基于细胞的效力生物测定测试确定了与参考标准相比,测试项目在相关测试系统中诱导特定反应的相对生物活性/能力。