细胞系鉴定和株检定方法

对主细胞库 (MCB)、工作细胞库 (WCB) 和生产终末细胞 (EPC/EOPC) 或用于生产的体外细胞年龄限定代次细胞 (CAL) 进行细胞系检定。根据现行法规和指南,必须考虑以下方面:

  • 细胞系细胞形态和生长特征的起源和历史
  • 细胞鉴别
  • 细胞系的纯度(即不存在污染细胞、微生物污染和外源病毒污染)
  • 成瘤性和致瘤性
  • 稳定性

细胞系鉴定包建议

考虑因素包括细胞系的物种(例如,仓鼠、人、鸡、大肠杆菌巴斯德毕赤酵母)及其预期用途(例如,重组蛋白生产、疫苗生产、基因治疗)。此外,应根据细胞系来源及其发展历史以及细胞生物学特征的记录,决定进行哪些检测。执行测定时,指导方针建议使用经过验证的检测程序,以显示其是否适合预期目的。

技术人员正在操作生物制品测试机

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微生物和哺乳动物细胞系检定方法

我们在美国和欧洲的工厂均提供经过验证的哺乳动物微生物细胞系检定方法。我们内部整理的法规数据库中提供了关于细胞系检定的指南参考。

下表列出了用于生产重组蛋白的一般哺乳动物和微生物细胞系表征的建议检测计划,以及 CHO 细胞的具体示例。

  • 哺乳动物细胞系检定
    哺乳动物细胞系检定推荐方案1 MCB WCB EPC/CAL
    微生物污染 无菌 X X X
    支原体 X X X
    分支杆菌 X    
    螺原体 X    
    细胞系鉴别 DNA 条形码 X X X
    DNA 指纹/STR X   X
    细胞核学型分析 X   X
    基因稳定性 DNA 测序 X   可选
    通过 qPCR/STR 分析基因拷贝数 X   X
    病毒检测 逆转录酶病毒:逆转录酶和逆转录病毒感染性检测 X   X
    体外外源病毒 X X X
    体内外源病毒 X   X
    检测特定病毒,例如:
    • 牛源病毒
    • 猪源病毒
    • 人类源病毒
    • 鼠细小病毒
    X    
    体内生物安全性:小鼠、仓鼠和大鼠抗体产生试验(MAP、RAP 和 HAP) X    
    透射电子显微镜 X   X
    成瘤性/致瘤性     X

    1基于下一代测序 (NGS) 技术的新分子方法也可以作为检测方案的补充。

  • 微生物细胞系检定
    微生物细胞系检定推荐方案 MCB WCB
    噬菌体检测 X X
    纯度 X X
    鉴别 X X
    活力 X X
    拷贝数 X X
    DNA 测序 X X
    可选标记的保留 X X
    重组载体的保留 X X
    限制性内切酶分析 X X
  • CHO 细胞系检定
    CHO 细胞系检定推荐方案 MCB WCB EPC/CAL
    微生物污染 无菌 X X X
    支原体 X X X
    细胞系鉴别 DNA 条形码 X X X
    基因稳定性 DNA 测序 X   X
    基因拷贝数 X   X
    限制性内切酶分析 X   X
    病毒检测 内源性和非内源性逆转录酶病毒:逆转录酶和逆转录病毒感染性检测 X   X
    体外外源病毒 X   X
    体内外源病毒(乳鼠和成年鼠、鸡胚) X   X
    检测特定病毒,例如:
    • 牛源病毒
    • 猪源病毒
    • 鼠细小病毒
    X    
    体内生物安全性:小鼠和仓鼠抗体产生试验(MAP 和 HAP) X    
    透射电子显微镜 X   X

     

考虑到所有这些因素,您必须确定最有效、最相关和最高效的细胞系检定计划。

我们如何支持您的计划?

DNA 的显微图像。

利用 NGS 对用于生物制品生产的细胞系进行检定:验证克隆性和细胞鉴别

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关于细胞系检定的常见问题 (FAQ):