螺原体和支原体检测分析

必须证明用于生物制品 生产的细胞基质不含外源因子,包括支原体。支原体污染检测必须在产品开发的各个阶段进行,包括原材料、细胞库、病毒种子库、未加工的收获液材料和最终产品。还建议对与植物或昆虫材料接触的生物制药产品进行螺原体检测。

合规支原体检测方法

支原体检测属于监管要求,支原体检测方法在全球范围内的一些药典、法规和指导文件中均有说明。传统的培养方法和指示细胞培养方法并非完全一致,可能会因不同司法管辖区而有所不同。

我们提供 所有相关药典检测方法,并执行 符合《美国药典 (USP) 通则》<63>、《欧洲药典 (EP) 通则》2.6.7 和《日本药典 (JP)》以及组合协议的支原体检测。

我们也提供螺原体检测。检测方法包括使用对照菌株,其中包括肺炎支原体、口腔支原体、鸡毒支原体、猪鼻支原体、滑膜支原体、莱拉维支原体和柑橘链球菌。

我们还提供使用大容量方法和定量 PCR 检测的支原体检测,以便快速得到结果。还可以进行支原体清除研究,以证明下游工艺灭活或去除支原体污染物的能力。

支原体检测试验方法

  • 培养方法

    科学家使用显微镜进行支原体检测

    • 检测样本直接接种到琼脂平板以及液体培养基中。 
    • 所选择的琼脂和液体培养基具有令人满意的营养特性,可支持多种支原体的生长。 
    • 每个支原体检测分析中都包含阴性和阳性对照,以检查系统适用性。
    • 在培养期间,液体培养物在多个时间点被传代培养到琼脂平板上,以观察支原体的生长。 
    • 在培养期结束时,用显微镜检查琼脂平板上是否存在支原体菌落。 
    • 总检测时间为 28 天。
  • 指示细胞培养法

    用于进行支原体检测的显微镜

    有些挑剔的支原体菌株被称为“不可培养”,因为它们不能在用于培养方法的标准培养基中生长。Vero 或 NIH3T3 细胞的培养物用于培养支原体。一周的潜伏期后,将细胞固定,用 DNA 结合荧光染料染色,并在显微镜下进行评估。 

    在支原体感染的情况下,当污染严重时,细胞表面和周围区域会出现明亮荧光的特征模式。

  • qPCR 方法

    准备进行螺原体检测的样本

    我们使用以下 qPCR 方法进行支原体检测:

    • 特异性核酸扩增及荧光探针技术:这种支原体检测分析检测特定核酸序列的存在,但不一定表明存在活支原体。
    • 肉汤培养物生长富集和 RT-PCR:这种测定包括核酸检测前的生长富集步骤,以从非活菌和残留环境源中区分活菌。样本在第 0 天和第 7 天进行检测。
    • 细胞与 RT-PCR 共培养的生长富集:这种支原体检测方法包括核酸检测前的生长富集步骤,以区分活生物体和非活生物体以及残留的环境来源。样本在第 0 天和第 5 天从细胞共培养中进行检测。
    • 螺原体检测:这种测定包括核酸检测前的生长富集步骤,以从非活菌和残留环境源中区分活菌。样本在第 0 天和第 7 天进行检测。

尽管 PCR 检测更常用于支原体检测,但监管机构并未普遍批准基于 PCR 的支原体检测。可以使用 PCR 作为过程控制和产品特定验证的补充方法;但是,需要对传统方法进行可比性研究,以证明这些方法是等效的。 

我们的专家可以帮助制定针对您产品的支原体检测策略。

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关于支原体检测的常见问题 (FAQ)